一、工作前的準備工作
實驗開始之前，把所有必需的物品置放置於內，其目的是盡可能減少雙臂揮動，減少破壞生物安全櫃的氣幕屏障的程度。
開始工作之前，需要調整椅子的高度使操作者的臉部在生物安全櫃前門上方。手和雙臂放入生物安全櫃中等待2分鐘，直到生物安全櫃調整完畢，才能處理物品。
試驗人員要牢記進風格柵不得被毛巾、登記簿、移液管等其他障礙物阻擋。
一切操作都必須在距離前面的格柵4英寸裡面的工作面上進行。
二、工作前後的凈化
開始實驗之前和實驗完成工作之後，需要至少讓生物安全櫃工作4min來完成“凈化”的過程，需要留出把污染的空氣排出生物安全櫃的時間。
作臺面、窗口內錶面、生物安全櫃內壁需必須要用75%酒精、含氯消毒劑或其他適合特殊操作的消毒劑擦拭。使用含氯消毒劑後，需要用無菌水擦拭第二次以除殘餘氯，防止其 腐蝕不鏽鋼臺面。
放到安全櫃的容器和材料的錶面需要該以75%的乙醇擦拭，以減少把環境的雜菌帶到安全櫃內。
